HCMEC細(xì)胞如何正確的轉(zhuǎn)染

　　常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)分為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（*轉(zhuǎn)染）和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染兩類(lèi)。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體存在。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染則指外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達(dá)，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動(dòng)子和其它調(diào)控元件的分析。

　　轉(zhuǎn)染方法不同，對(duì)轉(zhuǎn)染結(jié)果影響很大。常見(jiàn)的轉(zhuǎn)染方法有：

　　1.磷酸鈣法：該方法利用磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞原理得到瞬時(shí)或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染結(jié)果，操作簡(jiǎn)便但重復(fù)性差，不可用于原代細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。

　　2.DEAE-右旋糖苷法：帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負(fù)電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞，可用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，方法相對(duì)簡(jiǎn)便、結(jié)果可重復(fù)但對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用。

　　3.電穿孔法：利用高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位，DNA通過(guò)膜上形成的小孔導(dǎo)入。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染均適用。適用性廣但細(xì)胞致死率高，DNA和細(xì)胞用量大，需根據(jù)不同細(xì)胞類(lèi)型優(yōu)化電穿孔實(shí)驗(yàn)條件。

　　4.病毒介導(dǎo)法：通過(guò)侵染宿主細(xì)胞將外源基因整合到染色體中。適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞，體內(nèi)細(xì)胞等。

　　5.陽(yáng)離子脂質(zhì)體法：帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞從而形成穩(wěn)定轉(zhuǎn)染或瞬時(shí)性轉(zhuǎn)。該方法適用性廣，轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好，但轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清。轉(zhuǎn)染效果隨細(xì)胞類(lèi)型變化大。

　　6.顯微注射法：用顯微操作將DNA直接注入靶細(xì)胞核，適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)有限，多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的胚胎細(xì)胞。

 

　　HCMEC細(xì)胞的注意事項(xiàng)如下：

　　1收到細(xì)胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們。

　　2對(duì)于貼壁細(xì)胞，若細(xì)胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開(kāi)封，用75%酒精擦拭后平躺置于培養(yǎng)箱內(nèi)。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉；如細(xì)胞還不貼壁，將細(xì)胞離心收集移到新的培養(yǎng)瓶中，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問(wèn)題解決。

　　3建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和本公司技術(shù)部溝通交流。