PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線(xiàn)
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線(xiàn)，即為擴(kuò)增曲線(xiàn)。熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)一般分為基線(xiàn)期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線(xiàn)期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線(xiàn)性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問(wèn)題可以通過(guò)熔解曲線(xiàn) (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩?lái)說(shuō)，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為T(mén)aqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái)，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問(wèn)題，反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線(xiàn)檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類(lèi)基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱(chēng)TaqMan PCR，后來(lái)也叫Real-Time PCR，是美國(guó)PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線(xiàn)性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線(xiàn)性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
靛藍(lán)二磺酸鈉ATP2A1/SERCA1 (L24) Antibody羥基-甲酸

變色酸鈉,鉻變酸二鈉HMGCS1 (D1Q9D) Rabbit mAb氟-三氟酚

溴百里酚藍(lán)鈉鹽Phospho-Tie2 (Tyr992) Antibody衣康酸二甲酯

特地唑游離CDC37 (D28H7) Rabbit mAbN,N-二乙酰

水合氯;三氯乙Bcl-2 (D55G8) Rabbit mAb (Human Specific)聚氧乙氫化蓖麻油

對(duì)二甲氨基甲 (DMAB)Bcl-2 (D55G8) Rabbit mAb (Human Specific)2-基呋喃

特地唑;特地唑酸酯Tie2 (AB33) Mouse mAb硅藻土

酚紅鈉鹽Phospho-Tie2 (Ser1119) Antibody乙氧基椰油烷基

甲基-2-并噻唑酮腙鹽酸鹽，水合β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)N,N'-二甲基-1,2-環(huán)己二

赤蘚紅;赤蘚紅B鈉鹽Phospho-PI3 Kinase p85 (Tyr458)/p55 (Tyr199) Antibody順式-羥基-L-脯氨酸

達(dá)拉菲尼,達(dá)帕菲尼Phospho-PI3 Kinase p85 (Tyr458)/p55 (Tyr199) Antibody3,5-二溴甲酸

安賽蜜；AK糖Phospho-PI3 Kinase p85 (Tyr458)/p55 (Tyr199) Antibody甲酸甲酯

乙酰檸檬酸三丁酯NaPi2b/SLC34A2 (D6W2G) Rabbit mAbSOLUTOL HS 15

乙酰檸檬酸三乙酯Dexras1 Antibody2-溴-4'-乙酮

海藻酸nNOS (C7D7) Rabbit mAb對(duì)溴甲酸甲酯

維生素C棕櫚酸酯/L-抗壞血酸棕櫚酸酯EI24 (D3F6Z) Rabbit mAb氨基甲酸甲酯

阿斯巴甜Tri-Methyl-Histone H3 (Lys27) (C36B11) Rabbit mAb (Sepharose® Bead Conjuga)對(duì)甲酸甲酯

克拉維酸Fas (C18C12) Rabbit mAb肼基甲酸
屎腸球菌探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒20S蛋白酶體(20SP)ELISA試劑盒PROK1/PRK1/EG-VEGF  內(nèi)分泌腺衍生血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子抗體100 ul

2,3-二酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA試劑盒Phospho-PRK1 (Thr774)/PRK2 (Thr816)  酸化內(nèi)分泌腺衍生血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子抗體100 ul

Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒VEGF-C  血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C型抗體100 ul

Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)ELISA試劑盒VEGFB  血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子B抗體300 ul

Ⅰ型前膠原C末端肽(CTX-Ⅰ)ELISA試劑盒VEGF-D  血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子D型抗體100 ul

Ⅰ型前膠原(PCⅠ)ELISA試劑盒VEGFR1  血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1抗體20 ul

Ⅰ型膠原N末端肽(NTX)ELISA試劑盒VEGF Receptor 2/VEGFR2  血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2抗體100 ul

Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA試劑盒phospho-VEGF receptor 2 (Tyr951)  酸化血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2抗體20 ul

Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)ELISA試劑盒phospho-VEGF receptor 2 (Tyr1059)  酸化血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2抗體100 ul