客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
阿戈美拉?。↖型）Phospho-Akt Substra (RXRXXS*/T*) (23C8D2) Rabbit mAb1,2,3,四氫并[b]氮雜卓-5-酮

吡拉西坦Phospho-Histone H3 (Ser10) Blocking Peptide反式-1,2-環(huán)己烷二甲酸

雷美替Micrococcal Nuclease(1R,2R)-1,2-環(huán)己烷二甲酸

拉科酰β-Canin Blocking Peptide(1R,2R)-1,2-環(huán)己烷二甲

米那普侖鹽酸鹽 CD81 (D5O2Q) Rabbit mAb (Mouse Specific)1-甲基-吲唑甲酸

米那普侖鹽酸鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)HP1α Blocking Peptide氟-2-甲酸

丁那Neurofilament-L Blocking Peptide2-乙?；?5-硝基吡啶

丁那(標(biāo)準(zhǔn)品)TCF1/TCF7 Blocking Peptide6-氯噠-羧酸

氨己酸CTGF (E2W5M) Rabbit mAb6-溴喹喔啉

O-去甲文拉法辛(D,L)Acetyl- and Phospho-Histone H3 (Lys9/Ser10) Blocking Peptide氧基基酸

酚磺乙Cleaved Caspase-8 (Asp391) Blocking Peptide2-溴-6-甲氧基萘

酚磺乙（標(biāo)準(zhǔn)品）Jak1 Blocking Peptide5-甲氧基-1-茚酮

氟米松EGR1 Blocking Peptide2-甲氧基-5-氟吡啶

氟米松（標(biāo)準(zhǔn)品）LEF1 Blocking Peptide2-脒基吡啶鹽酸鹽

鹽酸利托君Phospho-Stat6 (Tyr641) (D8S9Y) Rabbit mAb (Alexa Fluor®647 Conjuga)7-溴吲哚

鹽酸利托君(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-NF-kappaB p105 (Ser933) Blocking Peptide3,二氯甲酸

硫酸茚地那韋Phospho-IKK-alpha/beta (Ser176/180) Blocking Peptide2-氟-5-羥基甲酸

他唑巴坦鈉 β-Actin Blocking Peptide2,二氟肼鹽酸鹽
大巴貝蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒Smad7 ELISA試劑盒Collagen IV  抗IV型膠原抗體20 ul

Smad1 ELISA試劑盒Collagen VI  抗Ⅵ型膠原抗體100 ul

Slit2 ELISA試劑盒Collagen VII  Ⅶ膠原抗體1 Kit

SCAF11蛋白(SFRS2IP/CASP11)ELISA試劑盒Collagen V  Ⅴ型膠原抗體100 ul

S100鈣結(jié)合蛋白A8/A9復(fù)合物(S100A8/A9)ELISA試劑盒Collagen X  Ⅹ型膠原抗體100 ul

S100蛋白(S-100)ELISA試劑盒Contactin-6  NB-3神經(jīng)粘附蛋白抗體1 Kit

S100-B蛋白(S100B)ELISA試劑盒Claudin 1  緊密連接蛋白1抗體100 ul

RAR的相關(guān)孤獨(dú)受體C(RORC)ELISA試劑盒Claudin 3  緊密連接蛋白3抗體100 ul

Qa淋巴細(xì)胞抗原2(Qa-2)ELISA試劑盒Claudin 4  緊密連接蛋白4抗體100 ul
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。