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豬肺炎支原體探針法熒光PCR檢測試劑盒

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更新日期:
2024-08-14
點(diǎn)擊次數(shù):
912
產(chǎn)品特點(diǎn):
豬肺炎支原體探針法熒光PCR檢測試劑盒保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
  50次豬肺炎支原體探針法熒光PCR檢測試劑盒的詳細(xì)資料:

特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!

產(chǎn)品名稱

豬肺炎支原體探針法熒光PCR檢測試劑盒

英文名稱

 Mycoplasma hyopneumoniae

貨號

 YSP96977

熒光染料的優(yōu)點(diǎn):
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便;
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合;
價格便宜;
熒光染料的缺點(diǎn):
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。
?
熒光探針:
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn):
熒光背景低;
敏感性高;
雜交穩(wěn)定性高;
熒光光譜分辨率好;
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn):
成本高;
設(shè)計難度大;
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
PCR技術(shù)的定量原理:
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。
?
熒光定量PCR原理:
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。
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豬肺炎支原體探針法熒光PCR檢測試劑盒cGMP依賴性蛋白激酶2抗體STAT1/FITC  熒光素標(biāo)記信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體IgG25 ug

結(jié)蛋白樣蛋白CGNL1抗體phospho-STAT1 (Ser727) /FITC   熒光素標(biāo)記酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體IgG25 ug

細(xì)胞生長調(diào)節(jié)蛋白CGREF1抗體STAT2/FITC  熒光素標(biāo)記信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子2(STAT2)抗體IgG100 ul

富含亮氨酸軟骨蛋白抗體Phospho-Stat2 (Tyr690)/FITC   熒光素標(biāo)記酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子2抗體IgG100 ul

軟骨蛋白樣蛋白抗體STAT3 /FITC  熒光素標(biāo)記信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體IgG100µl

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD3抗體phospho-STAT3 (Ser727) /FITC   熒光素標(biāo)記酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體IgG100 ul

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD10抗體STAT4 /FITC  熒光素標(biāo)記信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子4抗體IgG100 ul

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD7抗體Phospho-Stat4 (Tyr693) /FITC   熒光素標(biāo)記酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子4抗體IgG100 ul

ATP依賴的解旋酶CHD1抗體STAT5/FITC  熒光素標(biāo)記信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5(STAT5)抗體IgG20 ul

產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: 豬肺炎支原體 探針法 熒光PCR檢測試劑盒
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